
SARS-CoV-2 Kit tat-Test tal-Aċidu Nukleiku
Il-kit tat-Test ta' l-Aċidu Nukleiku SARS-CoV-2 japplika għall-iskoperta kwalitattiva ta' aċidu nuklejku ta' COVID-19 f'tampuni nażofarinġi, tampuni orofarinġi u sputum. Ir-riżultati tat-test jipprovdu bażi ta 'dijanjosi molekulari għal infezzjoni jew pazjenti suspettati, u m'għandhomx jintużaw bħala l-uniku kriterju għal dijanjosi klinika.
Deskrizzjoni
Użu Intenzjonat:
Il-kit tat-Test ta' l-Aċidu Nukleiku SARS-CoV-2 japplika għall-iskoperta kwalitattiva ta' aċidu nuklejku ta' COVID-19 f'tampuni nażofarinġi, tampuni orofarinġi u sputum. Ir-riżultati tat-test jipprovdu bażi ta 'dijanjosi molekulari għal infezzjoni jew pazjenti suspettati, u m'għandhomx jintużaw bħala l-uniku kriterju għal dijanjosi klinika.
Materjali:
Materjali | Speċifikazzjonijiet | Kulur tal-għatu | Kompożizzjoni |
Taħlita ta' Reazzjoni għall-COVID-19 | 1165µL ×1 tubu | Kannella | Buffer, dNTPs, Primers, Sondi. |
COVID-19Taħlita ta' Enżimi | 85µL ×1 tubu | Blu | Taq DNA polymerase, Reverse Transcriptase, UDG |
Kontroll Pożittiv | 200 µL ×1 tubu | Isfar | Psewdovirus tal-ġene Target u IC |
Kontroll Negattiv | 200µL×1tubu | Bla kulur | ddH2O |
Proċedura tat-Test:
A. Preparazzjoni tal-Kampjun
L-RNA estratt huwa l-materjal tal-bidu għall-kit tat-Test tal-Aċidu Nukleiku tas-SARS-CoV-2.
Importanti: Kull proċedura ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku għandha titwettaq simultanjament b'kontroll Pożittiv wieħed (40 μL, dilwit b'soluzzjonijiet salini sterili/PBS għall-volum mixtieq) u kontroll wieħed Negattiv (40 μL, dilwit b'soluzzjonijiet salini sterili/PBS għall-volum mixtieq).
Huwa rrakkomandat li tuża l-kits kummerċjali ta' estrazzjoni ta' aċidu nuklejku li ġejjin: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);
B. Setup tat-Taħlita tar-Reazzjoni
1. Ir-reaġenti u l-kampjuni kollha għandhom jinħallu kompletament, jitħalltu kompletament u jiġu ċentrifugati fil-qosor f'temperatura tal-kamra (medda approssimattiva minn 18 sa 25 grad) qabel l-użu.
2. Ipprepara l-volum meħtieġ tat-Taħlita ta' Reazzjoni f'tubu mikroċentrifugu tal-polypropylene ta' daqs xieraq.
3. Ippipetta 25 µL tat-Taħlita ta' Reazzjoni f'kull bir meħtieġ ta' pjanċa ta' reazzjoni tal-bir ottiku xieraq jew tubu ta' reazzjoni ottika xierqa.
C. Żieda tal-mudell
1. Żid 5 μL ta' RNA estratt minn Kampjuni/ Kontroll pożittiv/ Kontroll negattiv. Il-volum totali huwa 30 μL.
Setup tar-Reazzjoni | |
Taħlita ta' Reazzjoni għall-COVID-19 | 23.3 µL |
COVID-19Taħlita ta' Enżimi | 1.7 µL |
Kampjuni jew Kontrolli | 5 µL |
Volum Totali | 30µL |
2. Ħallat sewwa l-kampjuni u l-kontrolli bit-Taħlita ta' Reazzjoni billi tpoġġi bil-pipetta 'l fuq u' l isfel/Vortex.
3. Agħlaq il-96-pjanċa tar-reazzjoni sew b'għotjien xierqa jew film adeżiv ottiku u t-tubi tar-reazzjoni b'għotjien xierqa.
4. Iċċentrifuga l-{1}}pjanċa ta' reazzjoni sew f'ċentrifuga b'rotor tal-pjanċa tal-mikrotiter għal 30 sekonda f'madwar 2500rpm.
D. Ipprogrammar tal-Istrument tal-PCR Real-Time
Għal informazzjoni bażika dwar is-setup u l-ipprogrammar tal-istrumenti differenti tal-PCR f'ħin reali, jekk jogħġbok irreferi għall-manwal tal-utent tal-istrument rispettiv. L-assaġġ ġie ottimizzat għas-sistema ABI7500 Real-Time PCR. Il-ġirja tal-PCR titwettaq b'kundizzjonijiet taċ-ċikliżmu kif deskritt fit-tabella hawn taħt.
Nru. | Stadju | Temperatura | Tul ta' żmien | Ċikli | Ġbir tad-dejta |
1 | Reazzjoni ta' traskrizzjoni inversa | 50 grad | 10 min | 1 | / |
2 | Denaturazzjoni minn qabel | 95 grad | 30 sek | 1 | / |
3 | Dnaturazzjoni | 95 grad | 10 sek | 45 | / |
Ittemprar u estensjoni | 58 grad | 30 sek | Ġbir tal-fluworexxenza tal-punt tat-tmiem |
Iddefinixxi d-ditekters tal-fluworexxenza
Mira | Isem tad-ditekter | Reporter | Quencher |
RNA speċifiku għall-COVID-19 | Il-ġene ORF1ab fil-mira | FAM | Xejn |
Il-ġene N fil-mira | HEX/VIC | Xejn | |
Target E ġene | ROX | Xejn | |
Kontroll Intern | Ġene tal-kustodja | Cy5 | Xejn |
* Jekk jogħġbok issettja r-referenza interna tal-fluworexxenza tal-istrument għal "Xejn", pereżempju: Għall-istrumenti tas-serje ABI issettja "Referenza Passiva" għal "Xejn".
E. Analiżi tad-dejta
Jekk jogħġbok issettja l-parametri tal-analiżi u tanalizza d-dejta skont l-istruzzjonijiet tat-tħaddim tal-istrumenti rilevanti.
Ħu ABI 7500 bħala eżempju:
Il-Linja Bażi għandha tkun issettjata għal medda li telimina l-fluworexxenza fl-isfond misjuba fiċ-ċikli bikrija tal-amplifikazzjoni, iżda li ma tikkoinċidix iż-żona fejn is-sinjali tal-amplifikazzjonijiet jogħlew 'l fuq mill-isfond (Valur tal-bidu: 3~10; Valur tat-tmiem: {{2} }). Il-Limitu taċ-Ċiklu (Ct) għandu jkun fil-bażi tal-fażi esponenzjali. Ikklikkja "Analiżi" biex tikseb ir-riżultat tal-analiżi awtomatikament, u aqra r-riżultat tas-sejbien fit-tieqa "Rapport".
It-tags Popolari: sars - cov-2 nukleiku aċidu test kit, Iċ-Ċina, fornituri, manifatturi, fabbrika, bl-ingrossa
Ibgħat l-inkjesta
Tista 'Tħobb ukoll







