SARS-CoV-2 Kit tat-Test tal-Aċidu Nukleiku

SARS-CoV-2 Kit tat-Test tal-Aċidu Nukleiku

Il-kit tat-Test ta' l-Aċidu Nukleiku SARS-CoV-2 japplika għall-iskoperta kwalitattiva ta' aċidu nuklejku ta' COVID-19 f'tampuni nażofarinġi, tampuni orofarinġi u sputum. Ir-riżultati tat-test jipprovdu bażi ta 'dijanjosi molekulari għal infezzjoni jew pazjenti suspettati, u m'għandhomx jintużaw bħala l-uniku kriterju għal dijanjosi klinika.

Deskrizzjoni

Użu Intenzjonat:

Il-kit tat-Test ta' l-Aċidu Nukleiku SARS-CoV-2 japplika għall-iskoperta kwalitattiva ta' aċidu nuklejku ta' COVID-19 f'tampuni nażofarinġi, tampuni orofarinġi u sputum. Ir-riżultati tat-test jipprovdu bażi ta 'dijanjosi molekulari għal infezzjoni jew pazjenti suspettati, u m'għandhomx jintużaw bħala l-uniku kriterju għal dijanjosi klinika.


Materjali:

Materjali

Speċifikazzjonijiet

Kulur tal-għatu

Kompożizzjoni

Taħlita ta' Reazzjoni għall-COVID-19

1165µL ×1 tubu

Kannella

Buffer, dNTPs, Primers, Sondi.

COVID-19Taħlita ta' Enżimi

85µL ×1 tubu

Blu

Taq DNA polymerase, Reverse Transcriptase, UDG

Kontroll Pożittiv

200 µL ×1 tubu

Isfar

Psewdovirus tal-ġene Target u IC

Kontroll Negattiv

200µL×1tubu

Bla kulur

ddH2O


Proċedura tat-Test:

A. Preparazzjoni tal-Kampjun

L-RNA estratt huwa l-materjal tal-bidu għall-kit tat-Test tal-Aċidu Nukleiku tas-SARS-CoV-2.

Importanti: Kull proċedura ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku għandha titwettaq simultanjament b'kontroll Pożittiv wieħed (40 μL, dilwit b'soluzzjonijiet salini sterili/PBS għall-volum mixtieq) u kontroll wieħed Negattiv (40 μL, dilwit b'soluzzjonijiet salini sterili/PBS għall-volum mixtieq).

Huwa rrakkomandat li tuża l-kits kummerċjali ta' estrazzjoni ta' aċidu nuklejku li ġejjin: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);


B. Setup tat-Taħlita tar-Reazzjoni

1. Ir-reaġenti u l-kampjuni kollha għandhom jinħallu kompletament, jitħalltu kompletament u jiġu ċentrifugati fil-qosor f'temperatura tal-kamra (medda approssimattiva minn 18 sa 25 grad) qabel l-użu.

2. Ipprepara l-volum meħtieġ tat-Taħlita ta' Reazzjoni f'tubu mikroċentrifugu tal-polypropylene ta' daqs xieraq.

3. Ippipetta 25 µL tat-Taħlita ta' Reazzjoni f'kull bir meħtieġ ta' pjanċa ta' reazzjoni tal-bir ottiku xieraq jew tubu ta' reazzjoni ottika xierqa.


C. Żieda tal-mudell

1. Żid 5 μL ta' RNA estratt minn Kampjuni/ Kontroll pożittiv/ Kontroll negattiv. Il-volum totali huwa 30 μL.

Setup tar-Reazzjoni

Taħlita ta' Reazzjoni għall-COVID-19

23.3 µL

COVID-19Taħlita ta' Enżimi

1.7 µL

Kampjuni jew Kontrolli

5 µL

Volum Totali

30µL

2. Ħallat sewwa l-kampjuni u l-kontrolli bit-Taħlita ta' Reazzjoni billi tpoġġi bil-pipetta 'l fuq u' l isfel/Vortex.

3. Agħlaq il-96-pjanċa tar-reazzjoni sew b'għotjien xierqa jew film adeżiv ottiku u t-tubi tar-reazzjoni b'għotjien xierqa.

4. Iċċentrifuga l-{1}}pjanċa ta' reazzjoni sew f'ċentrifuga b'rotor tal-pjanċa tal-mikrotiter għal 30 sekonda f'madwar 2500rpm.


D. Ipprogrammar tal-Istrument tal-PCR Real-Time

Għal informazzjoni bażika dwar is-setup u l-ipprogrammar tal-istrumenti differenti tal-PCR f'ħin reali, jekk jogħġbok irreferi għall-manwal tal-utent tal-istrument rispettiv. L-assaġġ ġie ottimizzat għas-sistema ABI7500 Real-Time PCR. Il-ġirja tal-PCR titwettaq b'kundizzjonijiet taċ-ċikliżmu kif deskritt fit-tabella hawn taħt.

Nru.

Stadju

Temperatura

Tul ta' żmien

Ċikli

Ġbir tad-dejta

1

Reazzjoni ta' traskrizzjoni inversa

50 grad

10 min

1

/

2

Denaturazzjoni minn qabel

95 grad

30 sek

1

/

3

Dnaturazzjoni

95 grad

10 sek

45

/

Ittemprar u estensjoni

58 grad

30 sek

Ġbir tal-fluworexxenza tal-punt tat-tmiem

Iddefinixxi d-ditekters tal-fluworexxenza

Mira

Isem tad-ditekter

Reporter

Quencher

RNA speċifiku għall-COVID-19

Il-ġene ORF1ab fil-mira

FAM

Xejn

Il-ġene N fil-mira

HEX/VIC

Xejn

Target E ġene

ROX

Xejn

Kontroll Intern

Ġene tal-kustodja

Cy5

Xejn

* Jekk jogħġbok issettja r-referenza interna tal-fluworexxenza tal-istrument għal "Xejn", pereżempju: Għall-istrumenti tas-serje ABI issettja "Referenza Passiva" għal "Xejn".


E. Analiżi tad-dejta

Jekk jogħġbok issettja l-parametri tal-analiżi u tanalizza d-dejta skont l-istruzzjonijiet tat-tħaddim tal-istrumenti rilevanti.

Ħu ABI 7500 bħala eżempju:

Il-Linja Bażi għandha tkun issettjata għal medda li telimina l-fluworexxenza fl-isfond misjuba fiċ-ċikli bikrija tal-amplifikazzjoni, iżda li ma tikkoinċidix iż-żona fejn is-sinjali tal-amplifikazzjonijiet jogħlew 'l fuq mill-isfond (Valur tal-bidu: 3~10; Valur tat-tmiem: {{2} }). Il-Limitu taċ-Ċiklu (Ct) għandu jkun fil-bażi tal-fażi esponenzjali. Ikklikkja "Analiżi" biex tikseb ir-riżultat tal-analiżi awtomatikament, u aqra r-riżultat tas-sejbien fit-tieqa "Rapport".


It-tags Popolari: sars - cov-2 nukleiku aċidu test kit, Iċ-Ċina, fornituri, manifatturi, fabbrika, bl-ingrossa

Tista 'Tħobb ukoll

Basktijiet tax-Xiri